Дар атрофи мо қаҳрамонони ношиносе зиёданд, ки ба назар оддӣ метобанд, аммо дар асл онҳо дар хомӯшӣ ба мо саҳми калон мегузоранд. Протеиназа К "қаҳрамони ношинос" дар соҳаи ташхиси молекулавӣ аст, гарчанде ки дар муқоиса бо "калон ва пурқудрат" дар ин соҳа, протеиназа К он қадар пастсифат аст, ки мо муддати тӯлонӣ аҳамияти онро нодида гирифтаем. Бо пайдоиши эпидемияи нави тоҷ, талабот ба протеиназа К якбора афзоиш ёфт ва таъминот дар дохил ва хориҷ аз истеъмол хеле қафо мондааст ва ҳама ногаҳон дарк карданд, ки протеиназа К ин қадар муҳим аст.
Истифодаи протеиназаи К чист?
Протеиназа К як протеазаи серинӣ бо фаъолияти ферментҳои протеолитикӣ буда, метавонад фаъолиятро дар доираи васеи муҳитҳо (рН (4-12.5), буфери намаки баланд, ҳарорати баланди 70°C ва ғайра) нигоҳ дорад. Илова бар ин, фаъолияти протеиназа К аз ҷониби SDS, мочевина, EDTA, гуанидин гидрохлорид, гуанидин изотиоцианат ва ғайра бозмедорад ва миқдори муайяни шустушӯй низ метавонад фаъолияти протеиназа К-ро афзоиш диҳад. Дар табобати тиббӣ (безараргардонии вирусҳо ва микробҳо), хӯрокворӣ (нарм кардани гӯшт), чарм (нарм кардани мӯй), шаробсозӣ (тозакунии спирт), тайёр кардани аминокислотаҳо (парҳои вайроншуда), истихроҷи кислотаи нуклеинӣ, гибридизатсияи in situ ва ғайра, протеиназа К истифода мешавад. Истифодаи маъмултарин истихроҷи кислотаи нуклеинӣ мебошад.
Протеиназа К метавонад ҳама намуди сафедаҳоро дар намуна, аз ҷумла он гистонҳоеро, ки ба кислотаҳои нуклеинӣ сахт пайвастанд, ферментализатсия кунад, то ки кислотаҳои нуклеинӣ аз намуна ҷудо шуда, ба экстракт ворид шаванд ва қадами навбатии экстракт ва тозакуниро осон кунанд. Ҳангоми ошкор кардани кислотаи нуклеинии вирусӣ, протеиназа К яке аз ҷузъҳои муҳим дар маҳлули намунагирии вирус мебошад. Протеиназа К метавонад сафедаи қабати вирусро кафида, ғайрифаъол кунад, ки дар марҳилаи интиқол ва ошкоркунӣ бехатартар аст; илова бар ин, протеиназа К инчунин метавонад RNase-ро вайрон кунад, ки аз вайроншавии RNA-и вирусӣ пешгирӣ мекунад ва ошкор кардани кислотаи нуклеинро осон мекунад.
Шӯҳрати шабонаи протеиназаи К
Новобаста аз он ки дар соҳаи тадқиқоти илмӣ ва ё дар соҳаи IVD, истихроҷи кислотаи нуклеинӣ таҷрибаи аз ҳама асосӣ аст, аз ин рӯ протеиназа К ҳамеша мавҷудияти хеле муҳим буд. Аммо, дар гузашта, протеиназа К нисбат ба нақши худ хеле камтар маъруф буд. Қисми зиёди ин аз он сабаб буд, ки муносибати талабот ва пешниҳоди протеиназа К хеле устувор буд. Кам касон фикр мекунанд, ки таъминоти протеиназа К мушкилот эҷод мекунад.
Бо пайдоиши эпидемияи нави тоҷ, талабот ба санҷиши кислотаи нуклеинӣ афзоиш ёфтааст. То охири моҳи июни соли 2020, Чин қариб 90 миллион озмоиши нави тоҷро анҷом додааст ва ин рақам дар миқёси ҷаҳонӣ боз ҳам нигаронкунандатар аст. Дар таҷрибаҳои истихроҷи кислотаи нуклеинӣ, консентратсияи кории протеиназа К тақрибан 50-200 мкг/мл аст. Умуман, барои истихроҷи намунаи кислотаи нуклеинӣ тақрибан 100 мкг протеиназа К лозим аст. Дар истифодаи воқеӣ, барои баланд бардоштани самаранокии истихроҷи кислотаи нуклеинӣ, аксар вақт протеиназа К бо миқдори зиёд истифода мешавад. Ошкор кардани кислотаи нуклеинӣ дар коронавируси нав миқдори зиёди талаботро ба протеиназа К овардааст. Тавозуни аввалияи таъминот ва талабот ба протеиназа К зуд вайрон шуд ва протеиназа К як шабонарӯз ба маводи муҳими пешгирии эпидемия табдил ёфт.
Мушкилот дар истеҳсоли протеиназаи К
Гарчанде ки бо рушди эпидемия, арзиши муҳими протеиназа К аз ҷониби одамон қадр карда шудааст, шармовар аст, ки аз сабаби паст будани сатҳи протеиназа К, ширкатҳои ватанӣ дар истеҳсоли протеиназа К кам иштирок мекунанд. Вақте ки одамон мехоҳанд истеҳсоли протеиназа К-ро ба роҳ монанд. Дар раванди истеҳсолот маълум шуд, ки протеиназа К як протеини бениҳоят махсус аст. Васеъ кардани иқтидори истеҳсолии протеиназа К дар муддати кӯтоҳ хеле душвор аст.
Истеҳсоли протеиназаи К дар миқёси васеъ бо мушкилоти зерин рӯбарӯ мешавад:
1. Ифодаи паст
Протеиназа К метавонад аксари сафедаҳоро ғайримушаххас вайрон кунад ва ба ҳуҷайраҳои мизбони экспрессия заҳролудшавии ҷиддӣ расонад. Аз ин рӯ, сатҳи экспрессияи протеиназа К одатан хеле паст аст. Скрининги системаҳои экспрессия ва штаммҳое, ки протеиназа К-ро хеле зиёд экспресс мекунанд, одатан давраи дарозтарро талаб мекунад.
2. Боқимондаҳои пигментҳо ва кислотаҳои нуклеинӣ
Ферментатсияи миқёси калон миқдори зиёди пигмент ва боқимондаҳои кислотаи нуклеинии мизбонро ворид мекунад. Тоза кардани ин ифлосҳо бо раванди оддии тозакунӣ душвор аст ва тозакунии мураккаб хароҷотро зиёд ва суръати барқароршавиро коҳиш медиҳад.
3. Ноустуворӣ
Протеиназа К ба қадри кофӣ устувор нест, он метавонад худаш ферментатсия кунад ва нигоҳ доштани он дар ҳарорати 37°C барои муддати тӯлонӣ бе агенти муҳофизатӣ душвор аст.
4. Ба осонӣ бориш мешавад
Ҳангоми тайёр кардани хокаи яхкардашудаи протеиназа К, барои он ки миқдори сахти протеиназа К дар хокаи яхкардашуда зиёд бошад, илова кардани агенти муҳофизатии яхкардашуда бо консентратсияи баланд зарур аст, аммо вақте ки консентратсияи протеиназа К ба 20 мг/мл ва аз он болотар мерасад, он ба осонӣ ҷамъ мешавад. Ҷудошавӣ таҳшинро ба вуҷуд меорад, ки барои хушк кардани протеиназа К бо миқдори сахти баланд мушкилоти зиёд эҷод мекунад.
5. Сармоягузории калон
Протеиназа К дорои фаъолияти баланди протеаза буда, метавонад дигар протеазаҳоро дар лаборатория гидролиз кунад. Аз ин рӯ, протеиназа К барои тадқиқот, рушд ва истеҳсол ба минтақаҳои махсуси истеҳсолӣ, таҷҳизот ва кормандон ниёз дорад.
Маҳлули протеиназаи К-и XD BIOCHEM
XD BIOCHEM дорои платформаи пухташудаи ифода ва тозакунии сафедаҳо буда, таҷрибаи бой дар ифода ва тозакунии сафедаҳои рекомбинантӣ ва беҳсозии равандҳои истеҳсолӣ дорад. Тавассути ташкили босуръати як гурӯҳи тадқиқотӣ ва рушд, раванди истеҳсоли протеиназаи К дар миқёси калон бартараф карда шуд. Истеҳсоли моҳонаи хокаи хушкшудаи яхкардашуда беш аз 30 кг аст. Маҳсулот дорои кори устувор, фаъолияти баланди ферментӣ ва боқимондаҳои ситохром ва кислотаи нуклеинӣ мебошад. Хуш омадед ба тамос бо XD BIOCHEM Бастаи озмоиширо гиред (почтаи электронӣ:sales@xdbiochem.comТел: +86 513 81163739).
Ҳалли техникии XD BIOCHEM инҳоро дар бар мегирад:
Бо истифода аз ҳамгироии плазмидҳои бисёрнусха, штаммҳои дорои ифодаи баланд бо сатҳи ифодаи 8 г/л интихоб карда мешаванд, ки мушкили сатҳи пасти ифодаи протеиназаи К-ро бартараф мекунад.
Тавассути таъсиси раванди тозакунии бисёрзинагӣ, боқимондаҳои ситохроми мизбон ва кислотаи нуклеинии протеиназа К бомуваффақият аз арзиши стандартӣ поёнтар тоза карда шуданд.
Тавассути скрининги босифати формулаҳои буферии муҳофизатӣ, буфере интихоб карда шуд, ки метавонад протеиназаи К-ро дар ҳарорати 37°C устувор нигоҳ дорад.
Буферҳои скринингӣ мушкили онро, ки протеиназа К дар консентратсияҳои баланд ба осонӣ ҷамъ мешавад ва таҳшин мешавад, бартараф мекунанд ва заминаро барои хушккунии яхкунӣ ва хушккунии дорои миқдори зиёди сахти протеиназа К мегузоранд.
Намунаи XD BIOCHEM протеиназаи К
Санҷиши устувории протеиназаи XD BIOCHEM: пас аз 80 рӯз дар ҳарорати хонагӣ дар фаъолият тағйироти назаррас ба амал намеояд
Санҷиши устувории XD BIOCHEM протеиназаи K: пас аз 80 рӯз дар ҳарорати хонагӣ дар фаъолият тағйироти назаррас ба амал нахоҳад омад.
Муқоисаи таъсири истихроҷи кислотаи нуклеинии протеиназаи XD BIOCHEM K ва маҳсулоти рақиб. Дар раванди истихроҷи кислотаи нуклеинӣ мутаносибан XD BIOCHEM ва протеиназаи рақиб K истифода мешаванд. Самаранокии истихроҷи протеиназаи XD BIOCHEM K баландтар ва арзиши Ct-и гени мақсаднок пасттар аст.
Вақти нашр: 31 декабри соли 2021