Дитиотреитол (DTT) як агенти камкунандаи маъмул аст, ки онро иловаи нави сабз низ меноманд. Он як пайвастагии органикии хурди молекулавӣ бо ду гурӯҳи меркаптан (-SH) мебошад. Аз сабаби хосиятҳои камкунандаи худ ва устувории он, DTT дар таҷрибаҳои биохимия ва биологияи молекулавӣ васеъ истифода мешавад.
Нақши асосии DTT кам кардани пайвандҳои дисульфидӣ дар сафедаҳо ва дигар биомолекулаҳо мебошад. Пайванди дисульфидӣ қисми муҳими ҷамъшавӣ ва устувории сафедаҳо мебошад, аммо дар шароити муайяни таҷрибавӣ, ба монанди таҳлили SDS-PAGE-и редуксионӣ, рекомбинатсияи сафедаҳо ва ҷамъшавии сафедаҳо, барои кушодани сохтори фазоии сафеда, кам кардани пайванди дисульфидӣ ба ду гурӯҳи тиол зарур аст. DTT метавонад бо пайвандҳои дисульфидӣ реаксия кунад, то онҳоро ба гурӯҳҳои меркаптанӣ коҳиш диҳад ва бо ин васила сохтори фазоии сафедаро кушода, таҳлил ва коркарди онро осон кунад.
ДТТ инчунин метавонад барои ҳифзи фаъолият ва устувории ферментҳо истифода шавад. Дар баъзе аксуламалҳои катализшавандаи ферментҳо, фаъолияти фермент метавонад аз ҷониби оксидант коҳиш ёбад. ДТТ метавонад бо оксидантҳо реаксия кунад, то онҳоро ба моддаҳои безарар табдил диҳад ва бо ин васила фаъолият ва устувории ферментро ҳифз кунад.
Дар муқоиса бо агентҳои анъанавии коҳишдиҳанда, ба монанди β-меркаптоэтанол (β-ME), DTT агенти коҳишдиҳандаи бехатартар ва устувортар ҳисобида мешавад. Он на танҳо дар маҳлули обӣ устувор аст, балки хосиятҳои коҳишдиҳандаи худро дар шароити ҳарорати баланд ва кислота-асос низ нигоҳ медорад.
Истифодаи DTT нисбатан содда аст. Умуман, DTT дар буфери мувофиқ ҳал карда мешавад ва сипас ба системаи таҷрибавӣ илова карда мешавад. Консентратсияи оптималии DTT бояд мувофиқи таҷрибаи мушаххас муайян карда шавад ва одатан дар диапазони 0,1-1 мМ истифода мешавад. Консентратсияҳои пасттар метавонанд таъсири манфиро ба афзоиши ҳуҷайраҳо кам кунанд ва ситотоксикиро аз сабаби аз ҳад зиёд ифода шудани сафедаҳои мақсаднок коҳиш диҳанд. Консентратсияҳои баландтар метавонанд боиси бори аз ҳад зиёди мубодилаи моддаҳои ҳуҷайра шаванд, ки ба афзоиш ва самаранокии ифодаи ҳуҷайраҳо таъсир мерасонанд.
Роҳи муайян кардани консентратсияи оптималӣ метавонад арзёбии сатҳи ифодаи сафедаи мақсаднок тавассути гузаронидани санҷишҳои индуксионии IPTG дар консентратсияҳои гуногун бошад. Санҷишҳои хурди парваришро бо истифода аз як қатор консентратсияҳои IPTG (масалан, 0.1 мМ, 0.5 мМ, 1 мМ ва ғайра) анҷом додан мумкин аст ва таъсири ифода дар консентратсияҳои гуногунро бо муайян кардани сатҳи ифодаи сафедаи мақсаднок (масалан, ошкоркунии Western blot ё флуоресценсия) арзёбӣ кардан мумкин аст. Тибқи натиҷаҳои таҷрибавӣ, консентратсия бо беҳтарин таъсири ифода ҳамчун консентратсияи оптималӣ интихоб карда шуд.
Илова бар ин, шумо инчунин метавонед ба адабиёти дахлдор ё таҷрибаи дигар лабораторияҳо муроҷиат кунед, то диапазони консентратсияи маъмулан истифодашавандаи IPTG-ро дар шароити таҷрибавии монанд дарк кунед ва сипас мувофиқи ниёзҳои таҷрибавӣ оптимизатсия ва танзим кунед.
Қайд кардан муҳим аст, ки консентратсияи оптималӣ метавонад вобаста ба системаҳои гуногуни ифода, сафедаҳои мақсаднок ва шароити таҷрибавӣ фарқ кунад, аз ин рӯ беҳтар аст, ки онро дар асоси ҳар як ҳолат алоҳида оптимизатсия кунед.
Хулоса, DTT як агенти коҳишдиҳандаи маъмулан истифодашаванда аст, ки метавонад барои кам кардани пайвандҳои дисульфидӣ дар сафедаҳо ва дигар биомолекулаҳо ва ҳифзи фаъолият ва устувории ферментҳо истифода шавад. Он дар таҷрибаҳои биохимия ва биологияи молекулавӣ васеъ истифода шудааст.
Вақти нашр: 28 сентябри соли 2023