Dithiothreitol (DTT) як агенти маъмулан истифодашавандаи коҳишдиҳанда мебошад, ки ҳамчун иловаи нави сабз низ маълум аст.Он як пайвастагии хурди органикии молекулавӣ бо ду гурӯҳи меркаптан (-SH) мебошад.Аз сабаби хосиятҳои коҳишдиҳанда ва устувории худ, DTT дар таҷрибаҳои биохимия ва биологияи молекулавӣ васеъ истифода мешавад.
Нақши асосии DTT аз кам кардани пайвандҳои дисульфидӣ дар сафедаҳо ва дигар биомолекулаҳо мебошад.Пайванди дисульфидӣ як ҷузъи муҳими қабати сафедаҳо ва устувории сафедаҳо мебошад, аммо дар шароити муайяни таҷрибавӣ, ба монанди таҳлили коҳишёбандаи SDS-PAGE, рекомбинатсияи сафедаҳо ва қабатҳо, барои кушодани сохтори фазоии сафедаҳо пайванди дисульфидро ба ду гурӯҳи тиол кам кардан лозим аст. протеин.DTT метавонад бо пайвандҳои дисульфидӣ реаксия карда, онҳоро ба гурӯҳҳои меркаптан кам кунад ва ҳамин тавр сохтори фазоии сафедаро кушояд ва таҳлил ва коркарди онро осон кунад.
DTT инчунин метавонад барои ҳифзи фаъолият ва устувории ферментҳо истифода шавад.Дар баъзе реаксияҳои катализшаванда фаъолияти ферментро оксидант коҳиш додан мумкин аст.DTT метавонад бо оксидантҳо реаксия карда, онҳоро ба моддаҳои безарар кам кунад ва ба ин васила фаъолият ва устувории ферментро ҳифз кунад.
Дар муқоиса бо агентҳои анъанавии коҳишдиҳанда ба монанди β-меркаптоэтанол (β-ME), DTT агенти коҳишдиҳандаи бехатар ва устувортар ҳисобида мешавад.Он на танҳо дар маҳлули обӣ устувор аст, балки хосиятҳои коҳишдиҳандаи худро дар шароити ҳарорати баланд ва кислотаи асосӣ нигоҳ медорад.
Истифодаи DTT нисбатан содда аст.Умуман, DTT дар буфери мувофиқ гудохта мешавад ва сипас ба системаи таҷрибавӣ илова карда мешавад.Консентратсияи оптималии DTT бояд аз рӯи таҷрибаи мушаххас муайян карда шавад ва одатан дар доираи 0,1-1mM истифода мешавад.Консентратсияи пасттар метавонад таъсири манфиро ба афзоиши ҳуҷайраҳо коҳиш диҳад ва метавонад ситотоксикиро аз сабаби аз ҳад зиёди сафедаҳои мақсаднок коҳиш диҳад.Консентратсияи баландтар метавонад боиси сарбории аз ҳад зиёди мубодилаи ҳуҷайраҳо гардад, ки ба афзоиши ҳуҷайраҳо ва самаранокии ифода таъсир расонад.
Роҳи муайян кардани консентратсияи оптималӣ метавонад арзёбии сатҳи ифодаи сафедаи мақсаднок тавассути гузаронидани санҷишҳои индуксионии IPTG дар консентратсияи гуногун бошад.Санҷишҳои фарҳангии миқёси хурд метавонанд бо истифода аз як қатор консентратсияи IPTG (масалан, 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM ва ғайра) анҷом дода шаванд ва таъсири экспрессия дар консентратсияи гуногун метавонад тавассути муайян кардани сатҳи ифодаи сафедаи ҳадаф (масалан, ғарбӣ) арзёбӣ карда шавад. муайянкунии доғ ё флуоресцент).Аз рӯи натиҷаҳои таҷрибавӣ, консентратсияи беҳтарин бо таъсири экспрессия ҳамчун консентратсияи оптималӣ интихоб карда шуд.
Илова бар ин, шумо инчунин метавонед ба адабиёти дахлдор ё таҷрибаи лабораторияҳои дигар муроҷиат кунед, то диапазони консентратсияи IPTG-ро дар шароити шабеҳи таҷрибавӣ фаҳмед ва сипас мувофиқи эҳтиёҷоти таҷрибавӣ оптимизатсия ва танзим кунед.
Бояд қайд кард, ки консентратсияи оптималии метавонад вобаста ба системаҳои экспрессия, сафедаҳои мақсаднок ва шароити таҷрибавӣ фарқ кунад, аз ин рӯ беҳтар аст, ки дар ҳар як ҳолат оптимизатсия карда шавад.
Хулоса, DTT як агенти маъмулан истифодашавандаи коҳишдиҳанда мебошад, ки метавонад барои коҳиш додани пайвандҳои дисульфидӣ дар сафедаҳо ва дигар биомолекулаҳо ва ҳифзи фаъолият ва устувории ферментҳо истифода шавад.Он дар таҷрибаҳои биохимия ва биологияи молекулавӣ васеъ истифода шудааст.
Вақти фиристодан: сентябр-28-2023