4-Нитрофенил бета-D-галактопиранозид CAS:200422-18-0

Таъсир: ONPG субстратест, ки махсус барои муайян кардани мавҷудият ва фаъолияти ферменти β-галактозидаза истифода мешавад. Вақте ки ферменти β-галактозидаза мавҷуд ва фаъол аст, он ONPG-ро ба ду маҳсулот тақсим мекунад: o-нитрофенол ва ҳосилаи галактоза. Озодшавии o-нитрофенол боиси тағйирёбии ранги зард мегардад, ки онро бо истифода аз спектрофотометр чен кардан мумкин аст.

Татбиқ: ONPG дар таҳқиқоти биологияи молекулавӣ ва биохимия якчанд барномаҳоро дорад:

Муайян кардани фаъолияти β-галактозидаза: ONPG одатан барои чен кардан ва муайян кардани фаъолияти ферменти β-галактозидаза истифода мешавад. Суръати ташаккули o-нитрофенол, ки мустақиман ба фаъолияти фермент мутаносиб аст, метавонад бо спектрофотометрӣ чен карда шавад.

Ифода ва танзими ген: ONPG аксар вақт дар таҷрибаҳои марбут ба таҳқиқоти ифода ва танзими генҳо истифода мешавад. Он аксар вақт дар таҳлилҳои сафедаҳои синтезӣ, ба монанди системаи синтези lacZ, барои омӯзиши ифодаи генҳо таҳти назорати промоторҳои мушаххас истифода мешавад. Фаъолияти бета-галактозидаза, ки бо истифода аз ONPG чен карда мешавад, дар бораи сатҳи ифодаи ген маълумот медиҳад.

Скрининги фаъолияти β-галактозидаза: ONPG-ро метавон ҳамчун усули скрининги колориметрӣ дар технологияи ДНК-и рекомбинантӣ барои муайян кардани мавҷудият ва функсияи гени LacZ, ки β-галактозидазаро рамзгузорӣ мекунад, истифода бурд. Ин усули скрининг барои муайян кардани клонҳое, ки гени мавриди таваҷҷӯҳро дар бар мегиранд, кӯмак мекунад.

Омӯзиши кинетикаи ферментҳо: ONPG инчунин дар омӯзиши кинетикаи ферменти β-галактозидаза муфид аст. Бо чен кардани суръати реаксияи фермент-субстрат дар консентратсияҳои гуногуни субстрат, муайян кардани параметрҳои кинетикӣ ба монанди доимиҳои Михаэлис-Ментен (Km) ва суръати максималии реаксия (Vmax) имконпазир аст.