Консентратсияи оптималиро чӣ гуна бояд муайян кард?
Барои индуктори IPTG (изопропил-бета-д-тиогалактозид), консентратсияи баландтар ҳамон қадар беҳтар аст.Консентратсияи оптималӣ аз шароити мушаххаси таҷрибавӣ ва таъсири индуксионии дилхоҳ вобаста аст.
Умуман, консентратсияи IPTG дар доираи 0,1-1 мм истифода мешавад.Консентратсияи пасттар метавонад таъсири манфиро ба афзоиши ҳуҷайраҳо коҳиш диҳад ва метавонад ситотоксикиро аз сабаби аз ҳад зиёди сафедаҳои мақсаднок коҳиш диҳад.Консентратсияи баландтар метавонад боиси сарбории аз ҳад зиёди мубодилаи ҳуҷайраҳо гардад, ки ба афзоиши ҳуҷайраҳо ва самаранокии ифода таъсир расонад.
Роҳи муайян кардани консентратсияи оптималӣ метавонад арзёбии сатҳи ифодаи сафедаи мақсаднок тавассути гузаронидани санҷишҳои индуксионии IPTG дар консентратсияи гуногун бошад.Санҷишҳои фарҳангии миқёси хурд метавонанд бо истифода аз як қатор консентратсияи IPTG (масалан, 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM ва ғайра) анҷом дода шаванд ва таъсири экспрессия дар консентратсияи гуногун метавонад тавассути муайян кардани сатҳи ифодаи сафедаи ҳадаф (масалан, ғарбӣ) арзёбӣ карда шавад. муайянкунии доғ ё флуоресцент).Аз рӯи натиҷаҳои таҷрибавӣ, консентратсияи беҳтарин бо таъсири экспрессия ҳамчун консентратсияи оптималӣ интихоб карда шуд.
Илова бар ин, шумо инчунин метавонед ба адабиёти дахлдор ё таҷрибаи лабораторияҳои дигар муроҷиат кунед, то диапазони консентратсияи IPTG-ро дар шароити шабеҳи таҷрибавӣ фаҳмед ва сипас мувофиқи эҳтиёҷоти таҷрибавӣ оптимизатсия ва танзим кунед.
Бояд қайд кард, ки консентратсияи оптималии метавонад вобаста ба системаҳои экспрессия, сафедаҳои мақсаднок ва шароити таҷрибавӣ фарқ кунад, аз ин рӯ беҳтар аст, ки дар ҳар як ҳолат оптимизатсия карда шавад.
Вақти фиристодан: сентябр-28-2023